大小鼠穿梭實(shí)驗(主被動(dòng)回避)方法

大小鼠穿梭實(shí)驗（主被動(dòng)回避）方法

（active avoidance test）

一.實(shí)驗原理

穿梭實(shí)驗(active avoidance)是定量測定動(dòng)物行為學(xué)改變的重要手段，屬于經(jīng)典的聯(lián)合型學(xué)習條件反射，動(dòng)物通過(guò)學(xué)習能回避有害的刺激。穿梭實(shí)驗底部為不銹鋼柵，使用電流加非條件刺激，電擊動(dòng)物足底。頂部配置有噪聲發(fā)生器或光源，用來(lái)產(chǎn)生條件刺激。條件刺激數秒鐘后電擊。若在鈴聲刺激安全間隔期內大鼠逃向安全區則為主動(dòng)回避反應；如果在條件刺激安全間隔期內大鼠未逃向安全區，則通以交流電擊后逃向安全區的為被動(dòng)回避反應陽(yáng)性，否則為主動(dòng)、被動(dòng)回避反應陰性，此為一個(gè)循環(huán)周期。經(jīng)過(guò)反復訓練后，只給條件刺激，大鼠即逃到對側安全區以逃避電擊，此即形成了條件反射或稱(chēng)主動(dòng)回避反應，計算機自動(dòng)控制系統可記錄相關(guān)的動(dòng)物行動(dòng)參數。主動(dòng)回避時(shí)間是指動(dòng)物接受條件刺激的時(shí)間長(cháng)短，該值越短，說(shuō)明動(dòng)物主動(dòng)回避反應越迅速，學(xué)習記憶能力越強。

該實(shí)驗廣泛用于學(xué)習記憶功能、認知神經(jīng)科學(xué)、神經(jīng)生理學(xué)、神經(jīng)藥理學(xué)、認知功能退行性變性等實(shí)驗研究方面的研究，簡(jiǎn)單易操作，容易判別結果，可信度高，既可單獨作為檢測實(shí)驗提供課題參數，也可以作為其他學(xué)習記憶和認知功能實(shí)驗的輔助或預篩選實(shí)驗。

二.實(shí)驗裝置

廠(chǎng)家：上海欣軟信息科技有限公司

型號：XR-XC105

材質(zhì)：采用無(wú)味的ABS塑料材質(zhì)，顏色為黑色（內側壁）

組成：SuperAPAS穿梭實(shí)驗視頻分析軟件、穿梭箱（大小鼠、底部可通電）、SuperShocker刺激控制器以及隔音箱、揚聲器、視頻設備

三.實(shí)驗方法

• 在實(shí)驗前1-2天，每天撫摸實(shí)驗動(dòng)物1-5min，借以消除實(shí)驗動(dòng)物對實(shí)驗者的恐懼。
• 訓練期：先讓動(dòng)物在測試箱中自由活動(dòng)5min，以消除探究反射。將動(dòng)物置于穿梭實(shí)驗箱電擊區。先給予條件刺激(燈光)和(或)蜂鳴音（純音刺激）20 s（時(shí)長(cháng)可調節），然后給以10s（時(shí)長(cháng)可調節）的電刺激(電流強度為0.2-0.8mA，可調節)。如果在亮燈或聲音響20 s內大鼠逃向安全區為主動(dòng)回避反應，電擊后才逃向安全區為被動(dòng)回避反應。經(jīng)過(guò)數次訓練后，大鼠可逐漸形成主動(dòng)回避性條件反應，從而獲得記憶。共訓練20～40次，即設定測試次數為20～40次。
• 正式測試期：做實(shí)驗時(shí)，將實(shí)驗動(dòng)物置于穿梭箱電擊區，方法步驟同訓練期。記錄動(dòng)物遭受電擊的次數(被動(dòng)回避的次數)以及動(dòng)物主動(dòng)回避的次數；也可以記錄動(dòng)物主動(dòng)回避平均反應時(shí)間，該值越小，說(shuō)明動(dòng)物主動(dòng)回避反應越迅速。

四.實(shí)驗數據

主要應用的實(shí)驗數據：                        

1.觀(guān)察時(shí)間，動(dòng)物在實(shí)驗箱中活動(dòng)的總時(shí)間，該值越小，說(shuō)明動(dòng)物發(fā)生主動(dòng)回避次數越多                          

2.主動(dòng)回避次數，實(shí)驗開(kāi)始后動(dòng)物在燈光聲音發(fā)生過(guò)程中逃至安全區的次數

3.被動(dòng)回避次數，動(dòng)物受到電刺激發(fā)生躲避逃至安全區的次數

4.主動(dòng)回避平均反應時(shí)間，記錄每次從燈光或聲音開(kāi)始到發(fā)生主動(dòng)回避的時(shí)間，將其累計總和除以主動(dòng)回避次數得到該值

5.被動(dòng)回避平均反應時(shí)間，記錄每次從電刺激開(kāi)始到發(fā)生被動(dòng)回避的時(shí)間，將其累計總和除以被動(dòng)回避次數得到該值

6.其余指標：無(wú)反應次數、主動(dòng)回避潛伏期、被動(dòng)回避潛伏期

其中主動(dòng)/被動(dòng)回避次數指標作為評價(jià)學(xué)習記憶能力的重要指標，主動(dòng)回避次數值越大，說(shuō)明動(dòng)物記憶能力越好，主動(dòng)回避平均反應時(shí)間值越小，說(shuō)明動(dòng)物記憶越深刻，反應越迅速

五.注意事項

1． 保持實(shí)驗室安靜，光線(xiàn)不宜過(guò)強，盡量避免給動(dòng)物額外刺激。
2． 實(shí)驗中應及時(shí)清除銅柵上的糞便等雜物，以免影響刺激鼠的電流強度。
3． 動(dòng)物在24h內有其活動(dòng)周期，故每次實(shí)驗應選擇同一時(shí)間(上午8～12點(diǎn)或下午1～4點(diǎn))，前后2天的實(shí)驗要在同一時(shí)間內完成。

4.  電柵欄每次清洗后需要等*干燥以后再次使用，以免引起電流刺激不均勻或者短路。

5.  如果老鼠長(cháng)時(shí)間逗留徘徊在實(shí)驗箱中間過(guò)道門(mén)位置，在正常人為干擾下也不能離開(kāi)，應該考慮剔除該數據。

6.  在電刺激時(shí)候，有些動(dòng)物會(huì )選擇一些特殊的方式來(lái)躲避，比如瞬間多次跳躍或者支撐性站立起來(lái)，這些偶然情況也會(huì )導致正常的主被動(dòng)回避次數出現較大誤差，也應該考慮剔除。